El uso más recomendado para Enervac es en el tratamiento de la acetonemia ya que siendo un precursos glucogénico ayuda a subir los niveles de glucosa sanguínea en menos de 30 minutos al suministrar 300 ml por vía oral.

En los estados de desmejoramiento orgánico donde se presume que existe un cuadro de hipoglicemia el propilenglicol puede estar indicado y es de gran utilidad así como también en casos de enfermedades por hematozoarios, en partos laboriosos y traumáticos, en casos de vaca caída y en general en cualquier caso donde se requiere suministrar niveles altos de energía de asimilación rápida.

Se ha descubierto también que el propilenglicol (Enervac) juega un papel muy importante en la recolección de embriones. Según estudios realizados en Europa, el propilenglicol mejora la cantidad y calidad de óvulos fertiles colectados mediante lavado pues este producto aumenta los niveles de insulina circulante en sangre por lo cual se produce una mayor liberación de hormonas de la reproducción.

El mismo estudio concluye que el uso de propilenglicol mejora los porcentajes de preñez por transferencia de embriones al aumentar la calidad del cuerpo luteo y los niveles de progesterona (P4) permitiendo que más receptoras sean aptas para recibir un embrión.

Otros estudios realizados por Miyoshi et al demostraron que la administración de propilenglicol en vacas posparto aumentaban los niveles de insulina y por lo tanto mejoraban los índices de fertilidad al producirse un retorno más rápido de la actividad ovárica.

Este artículo es apenas una breve reseña del producto. Quienes estén interesados en saber un poco más del tema pueden contactar al Dr. Carlos Sanabria de Laboratorios Pharvet llamando al teléfono 314 297 4663 o escribiendo al correo electrónico sanabria_21@hotmail.com.

Las imagenes de este artículo fueron tomadas de aquí.

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Los embriones se buscan con un estereomicroscopio en magnificación 10-15X. Teniendo el medio en una caja de petri se pone una placa cuadriculada bajo esta para facilitar la búsqueda y clasificación. Luego de haber encontrado el último embrión se busca una o dos veces más para descartar que alguna futura cría se nos haya quedado en el medio.

Un oocito mide aproximadamente 150-190µm y tiene una zona pelúcida de aproximadamente 12-15µm. Este diámetro permanece sin variaciones considerables desde que tiene una célula hasta que se encuentra en fase de blastocisto expandido. El técnico puede contar las células del embrión sin dificultad hasta que este tiene 16 células, luego de esto, las células se dividen asincrónicamente e identificarlas se hace un poco difícil. Cuando las células comienzan a adherirse entre ellas y comienzan a perder su forma esférica el embrión recibe el nombre de mórula.

La zona pelúcida se observa como una estructura transparente que rodea a las células. Entre la zona pelúcida y las células existe un espacio llamado espacio perivitelino. Este espacio perivitelino es identificable hasta que el embrión se encuentra en estado de blastocisto.

En la imagen anterior vemos: 1. Zona pelúcida; 2. Masa celular; 3. Espacio perivitelino.

Los estados de desarrollo del embrión se identifican, después de tener 16 células, de acuerdo al desarrollo morfológico.

Mórula (Estadio 4): Las células (blastómeras) son difíciles de distinguir unas de otras. El embrión tiene aproximadamente 5 días.

Mórula compacta: Las blastómeras se juntan y forman una masa celular sólida. El embrión ocupa aproximadamente un 60% del espacio perivitelino.

En la imagen anterior vemos una mórula (Estado 4)

Blastocisto temprano (Estadio 5): Presenta una cavidad en donde se encuentra un fluido llamado blastocele. El embrión ocupa el 70-80% del espacio perivitelino. Se puede diferenciar el trofoblasto y el macizo celular interno. Luego de esta etapa viene el Blastocisto (Estadio 6) propiamente dicho. La única diferencia entre estos dos estados es básicamente el tamaño de la cavidad.

En la imagen anterior vemos un Blastocisto. Nótese la cavidad y el fluido (1).

Blastocisto expandido (Estadio7): El diámetro aumenta hasta en un 150%. La zona pelúcida se adelgaza hasta un 66% con respecto al grosor que tenía en el Estado 4. Estos embriones tienen una edad estimada de 8 a 9 días.

Nótese en esta imágen el adelgazamiento de la zona pelúcida

Blastocisto eclosionado (Estadio 8): La masa celular puede estar por fuera de la zona pelúcida o en proceso de salir. Luego viene un estado llamado Blastocisto eclosionado expandido (Estadio 9).

El grado de desarrollo de un embrió se determina por números en donde el número 1 identifica un oocito sin fertilizar, el número 2 nos identifica un embrión con hasta 16 células (2 a 5 días). El número 3 identifica una mórula temprana y los números del 4 al 9 nos identifican embriones que ya presentaron compactación. En un lavado convencional los embriones son colectados entre los días 6 y 8, o sea entre mórula y blastocisto.

En resúmen los estadios del embrión son los siguientes:

Estado 1: Infertilizado

Estado 2: de 2 a 16 células

Estado 3: Mórula temprana

Estado 4: Mórula

Estado 5: Blastocisto temprano

Estado 6: Blastocisto

Estado 7: Blastocisto expandido

Estado 8: Blastocisto eclosionado

Estado 9: Blastocisto eclosionado en expansión

En la imagen anterior vemos: 1. Mórula compacta; 2. Infertilizados; 3. Mórulas tempranas; 4. Infertilizado.

Nótese en la imagen anterior que en la mórula compacta no podemos diferenciar bien las células mientras que en las mórulas tempranas sí. Los infertilizados los identificamos porque su interior es un óvalo bien delimitidado y al observarlo detenidamente vemos que ése interior esta compuesto no por bordes (segmentos) sino por gránulos (estructura de puntillismo).

Hasta aquí hemos visto a grosso modo la clasificación de los embriones según su estado. Ahora veamos la calificación que le damos a los embriones de acuerdo a su calidad.

La evaluación la damos de acuerdo a sus características morfológicas. Estas características son subjetivas y pueden variar de un técnico a otro. Las características que debemos tener en cuenta para calificar un embrión son:

1. Forma del embrión
2. Color y textura de la masa celular
3. Diferencia de tamaño entre las blastómeras
4. Numero y nivel de compactación de las blastómeras
5. Tamaño del espacio perivitelino
6. Presencia de blastómeras sueltas o separadas
7. Presencia o ausencia de vesículas
8. Forma y estado de la zona pelúcida

Si en la clasificación utilizábamos una escala numérica del 1 al 9 en la calificación vamos a utilizar una escala numérica que va del 1 al 4:

Calidad 1: Embriones excelentes y buenos. Son embriones esféricos, simétricos con células de tamaño, color y texturas uniformes. Puede haber pequeñas imperfecciones como algunas blastómeras sueltas, tamaño irregular o algunas vesículas. Estos embriones son los ideales para congelar.

Calidad 2: Embriones regulares. Tienen problemas más definidos incluyendo blastómeras sueltas, vesículas o células degeneradas. Estos embriones pueden ser congelados pero se obtendrán resultados bajos. Sin embargo son embriones aceptables para ser transferidos en fresco (de donadora a receptora directamente sin congelación).

Calidad 3: Embriones malos. Numerosas blastómeras sueltas, células degeneradas. Células de distinto tamaño, color y textura, formas irregulares. Numerosas vesículas. No se deben congelar y al ser transferidos en fresco nos dan resultados pobres.

Calidad 4: Muertos o degenerados. Son embriones cuyas blastómeras se encuentran en desorden y sueltas. Hay muchas vesículas. Puede tener un aspecto granular como los infertilizados y tener un crecimiento retardado con respecto a los otros embriones de la colecta. No se congelan ni se transfieren en fresco.

En la imagen anterior vemos diferentes estructuras dentro de las cuales se identifican mórulas, blastocistos, infertilizados y degenerados. Que el estudiante determine cual es cual en la imagen.

Teniendo en cuenta lo visto en cuanto a clasificación y calificación en la práctica podemos encontrarnos, entre otros, con los siguientes embriones:

• 4:1 mórula de excelente calidad. Transferible y congelable.
• 4:2 mórula regular. Resultados bajos al congelar y resultados buenos al transferir en fresco.
• 4:3 mórula mala. No congelable y resultados bajos al transferir en fresco.
• 4:4 muerto o degenerado. No congelable y no transferible.
• 5:1 blastocisto de excelente calidad. Transferible y congelable.
• 5:2 blastocisto regular. Resultados bajos al congelar y buenos al transferir en fresco.
• 5:3 blastocisto malo. No congelable y resultados bajos al transferir en fresco.
• 5:4 muerto o degenerado. No congelable y no transferible.

También podemos encontrar embriones de otro tipo como 6:1 ó 7:3 pero el ejemplo aplica para todos. Feliz fin de semana, luego seguimos hablando del tema.

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• Higiene de la vulva y zonas adyacentes.
• Secado.
• Introducción de un brazo por vía rectal.
• Introducción de la sonda Foley vía vaginal.
• Pasamos vagina, cervix, cuerpo y llegamos al cuerno.
• Retiramos un poco el estilete.
• Inflamos el balón con medio de lavado (PBS).
• Sacamos el estilete.
• Liberamos medio y lavamos el cuerno.

MATERIALES

Mangas de palpación; Guantes de látex; Lactato de Ringer; PBS (Medio de lavado); Sondas Foley; Estiletes; Medios de conducción; Filtros (Minitube); Cajas de Petri; Alcohol; Jeringas; Lidocaína (Sin epinefrina).

PROCEDIMIENTO

Palpamos los ovarios por vía rectal para comprobar la respuesta al tratamiento de superovulación. Luego de la palpación se puede hacer uso del ecógrafo. Si la respuesta fue positiva procedemos a pasar la sonda Foley y a lavar los cuernos.

Una vez hayamos lavado los dos cuernos llevamos el filtro al laboratorio improvisado en la finca para comenzar su busqueda y clasificación.

Se buscan los embriones y estructuras infertilizadas con magnificación 15x. Una vez encontrados se separan los ovocitos infertilizados y los embriones degenerados de los buenos o viables. Los embriones viables se llevan a otra caje de Petri con medio PBS y una vez haya terminado la busqueda y clasificación se lavan 10 veces.

Si los embriones van a ser transferidos en fresco se empajillan en medio PBS y si van a ser congelados se empajillan en Etilenglicol (EG). En este caso vamos a preparar los embriones para congelarlos..

El empajillado del embrion es muy sencillo. Para ello vamos a utilizar una jeringa de insulina y una punta de pipeta. Ponemos la pajilla esteril dentro de la punta de pipeta y con la jeringa aspiramos una columna de medio, luego una columna de aire, nuevamente una columna de medio y una columna de aire. Teniendo dos columnas de medio y dos columnas de aire aspiramos el embrion con su respectivo medio (PBS o EG) y repetimos el procedimiento anterior. Una vez empajillados los embriones hacemos uso de la congeladora.

Cargamos la congeladora con nitrógeno líquido y ponemos las escalerillas y los goblets que luego van a contener los embriones en el termo criogénico.

Con un hisopo de algodón aplicamos un poco de nitrógeno líquido en las puntas de la pajilla. Esto evita que al congelar la pajilla se formen cristales que dañen el embrión. Luego de esto procedemos al congelamiento gradual de los embriones primero a -6°C; luego a -32°C y por último a -196°C.

Hay que tener presente que los embriones congelados deben ir siempre en las canastillas de abajo e inmersos en nitrógeno. Este procedimiento debe ser desarrollado por un profesional. El objetivo de este artículo es estrictamente didáctico pues la técnica de colecta, congelación y transferencia de embriones es más compleja de lo que se puede mostrar en medios audiovisuales.

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